Desenvolvimento e validação de uma metodologia analítica para a detecção e quantificação da Amoxicilina em músculo, por LC-MS/MS

Andreia Alexandra Ribeiro Freitas

Key information

Authors:

Andreia Alexandra Ribeiro Freitas (Andreia Alexandra Ribeiro Freitas)

Supervisors:

. Jorge Barbosa (. Jorge Barbosa); Maria Amélia Loureiro dos Santos Seabra (Maria Amélia Loureiro dos Santos Seabra)

Published in

11/26/2008

Abstract

Amoxicillin is one pharmacological active compound with antimicrobial properties, an antibiotic of the penicillin’s group. This compound is one of the most important of antibiotic class usually called beta-lactams. Like the other semi-synthetic penicillins, the amoxicillin was obtained in order to get a broad – spectrum antibiotic. Effective against gram-positive and gram-negative bacteria, is more stable in the gastric tract and has high absorption when administrated orally than the natural penicillins. It’s pharmacological and pharmacokinetic properties makes amoxicillin a widely used antibiotic in human and veterinary medicine. The veterinary use can be expanded and the antibiotics can be used as growth promoters in animals used for food production. Although the use of this compound is not forbidden, with maximum residue limit established of 50 µg/kg for meat, to protect the consumers some restrictions have to be fulfilled when used by the producers. This study was focused on the development and validation of an analytical methodology, by liquid chromatography tandem mass spectrometry (LC-MS/MS), for the detection and quantification of amoxicillin in meat according to the established criteria of European Union. A stability study of that compound was performed with the intention to understand better its degradation and characterize its main products. The main issues were successfully treated, with the result of having now a validated method, according with EU requirements. The following limits were set: A detection limit (LD) of 5 µg/kg and a quantification limit (LQ) of 8 µg/kg. The decision limit (CCα) and the capacity of detection (CCβ) obtained for amoxicillin were 56 µg/kg and 67 µg/kg. A amoxicilina é um composto farmacologicamente activo com propriedades antimicrobianas, pertencente ao grupo das penicilinas. Este composto é um dos mais importantes da classe a que genericamente se dá o nome de antibióticos beta-lactâmicos. A par com outras penicilinas semi-sintéticas, a amoxicilina foi desenvolvida com o intuito de aumentar o espectro de acção antimicrobiano, tendo em conta os compostos que existiam. Eficaz contra bactérias grampositivas e gram-negativas, revela-se mais resistente ao tracto gástrico, demonstrando, portanto, uma maior absorção quando administrado por via oral, comparativamente com as penicilinas naturais. Dadas as suas propriedades farmacológicas e farmacocinéticas, a amoxicilina é muito utilizada em medicina humana e medicina veterinária. Neste último caso, o seu uso pode ultrapassar os limites da terapêutica e chegar a ser administrada com a finalidade de promover o crescimento de animais em produção intensiva. Uma vez que a utilização deste composto, embora permitida, estando estabelecido limite máximo de resíduo (LMR) em músculo de 50 µg/kg, encontra-se sujeita a restrições, torna-se necessário controlar a sua boa aplicação por parte dos produtores, para defesa dos consumidores. Este estudo centrou-se no desenvolvimento e na validação de uma metodologia analítica, por cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massa sequencial (LC-MS/MS), para a detecção e quantificação da amoxicilina em músculo, de acordo com os critérios estabelecidos pela União Europeia. Foi igualmente efectuado um estudo de estabilidade do composto, de forma a conhecer as condições em que ocorre a sua degradação e, a partir daí, caracterizar os principais produtos assim originados. Os objectivos propostos foram concretizados, obtendo-se um método validado de acordo com os requisitos da União Europeia. O limite de detecção (LD) do método é de 5 µg/kg e o limite de quantificação (LQ) é 8 µg/kg. Relativamente ao limite de decisão (CCα) e à capacidade de detecção (CCβ) para a amoxicilina, estes são, respectivamente, de 56 µg/kg e 67 µg/kg.